För att förhindra korskontaminering under drift är de viktigaste kraven för dess konstruktion, konstruktion och drifthantering:
1. Laboratoriedesign och -konstruktion, säkert arbetssystem eller driftsförfaranden för säkerhetsstandard ska uppfylla kraven i gällande GG-offert; Allmänna krav för laboratoriebiosäkerhet GG-kvot; GB19489.
2. PCR är indelat i fyra funktionella områden enligt arbetsstegen, nämligen reagenslagrings- och beredningsområde, provberedningsområde, amplifieringsområde och amplifieringsproduktanalysområde. Om ett fluorescerande PCR-instrument i realtid är utrustat kan områdena för förstärkning och produktanalys kombineras. Varje funktionsområde måste vara tydligt markerat och utrustning och artiklar i olika funktionsområden får inte blandas.
Luftflödesriktningen för PCR-laboratoriet kan utföras i enlighet med reagenslagrings- och beredningsområdet → provberedningsområdet → amplifieringsområde → amplifierat produktanalysområde för att förhindra att de förstärkta produkterna kommer in i det förförstärkta området tillsammans med luftflödet. Det kan utföras på ett sätt att sänka lufttrycket från reagenslagring och beredningsområde → provberedningsområde → förstärkningsområde → förstärkningsproduktanalysområde. Det kan uppnås genom att installera avgasfläktar, avgasanordningar för negativt tryck eller andra genomförbara metoder.
3. Att komma in i varje arbetsområde bör strikt följa en enda riktning, det vill säga reagenslagring och beredningsområde → provberedningsområde → förstärkningsområde → förstärkningsproduktanalysområde. Olika arbetsområden (som olika färger) bör användas. Arbetare får inte ta ut arbetskläder när de lämnar varje arbetsområde.
4. Rengöringen av laboratoriet bör utföras i riktning mot reagenslagring och beredningsområde → provberedningsområde → förstärkningsområde → förstärkt produktanalysområde. Olika försöksområden bör ha sina egna rengöringsapparater för att förhindra korskontaminering.
5. När arbetet är över måste arbetsområdet omedelbart rengöras. Ytan på laboratoriebänken i arbetsområdet ska kunna motstå desinfektions- och rengöringseffekter av kemikalier som natriumhypoklorit. Den ultravioletta bestrålningen på ytan av laboratoriebänken bör vara bekväm och effektiv. Eftersom avståndet och energin för den ultravioletta bestrålningen är mycket kritisk för dekontamineringseffekten, kan en rörlig ultraviolett lampa (254 nm våglängd) användas, och efter att arbetet är avslutat kan det justeras för att bestråla inom 60-90 cm på experimentbordet . Eftersom den amplifierade produkten endast är några hundra eller tiotals baspar (bp) är den inte känslig för UV-skador, så det UV-bestrålade amplifierade fragmentet måste bestrålas under en längre tid, företrädesvis över natten.
Reagenslagrings- och beredningsområdets funktioner är: beredning av lagringsreagens, dispensering av reagens och beredning av amplifieringsreaktionsblandningen, samt lagring och beredning av förbrukningsartiklar såsom centrifugrör och spetsar. Material som lagringsreagens och förbrukningsartiklar som används för provberedning bör transporteras direkt till reagenslagrings- och beredningsområdet och kan inte passera genom amplifieringsdetekteringsområdet. De positiva kontrollmaterialen och kvalitetskontrollmaterialen i satsen ska inte förvaras i det här området utan bör förvaras i det här området. Provbehandlingsområde.
Funktionen för provberedningsområdet är: extraktion av nukleinsyra (RNA, DNA), lagring och tillsats till amplifieringsreaktionsröret. För operationer som omfattar kliniska prover ska kraven för skyddsutrustning, personligt skydd och driftsspecifikationer för sekundära laboratorier för biosäkerhet vara uppfyllda. Eftersom kontaminering med aerosoler kan inträffa under provblandning och rening av nukleinsyra, kan förhållanden med positivt tryck upprättas i detta område för att undvika aerosolkontaminering från angränsande områden. För att undvika korskontaminering mellan prover, efter tillsats av nukleinsyran som ska testas, måste reaktionsröret innehållande reaktionsblandningen täckas. För potentiellt smittsamma material måste locket öppnas i det biologiska säkerhetsskåpet och det måste finnas tydliga förfaranden för provhantering och inaktivering.
Funktionen för amplifieringszonen är: DNA-syntes, DNA-amplifiering och detektion. För att undvika förorening orsakad av aerosoler bör promenader i området minimeras. Det måste noteras att alla testade reaktionsrör inte får öppnas i detta område.
Funktionen för det amplifierade produktanalysområdet är: vidare analys och bestämning av amplifierade fragment, såsom hybridisering, enzymsmältningselektrofores, denaturering av vätskeanalys med hög prestanda, sekvensering etc. Nukleinsyraamplifieringsprodukter har olika analysmetoder, såsom sondhybridiseringsmetoder på membran eller på mikroplattor eller chips (radionuklidmärkning eller icke-radioaktiv nuklidmärkning), direkt eller digererad agarosgelelektrofores, polyakrylamidgelelektrofores, sydlig överföring, nukleinsyrasekvenseringsmetoder, masspektrometri, etc.
Området för förstärkningsproduktanalys är den huvudsakliga källan för förstärkning av förstärkningsprodukter i PCR-laboratoriet, så man bör se till att undvika att förstärka produkten genom artiklarna och arbetskläderna i detta område. När man använder PCR-ELISA-metoden för att detektera förstärkta produkter, måste en plattbricka användas för att tvätta plattorna, och avfallsvätskan måste samlas i 1 mol / L HCl och kan inte hällas i laboratoriet, utan bortskaffas från PCR-laboratoriet. Släppa. Den använda spetsen måste också blötläggas i 1 mol / L HCl och sedan placeras i en sopapåse för bortskaffande enligt förfaranden, såsom förbränning. Eftersom detta område kan använda vissa genetiska mutationer och giftiga ämnen som etidiumbromid, akrylamid, formaldehyd eller radionuklider, etc., bör experternas säkerhetsskydd vara uppmärksam på.