Kärnan i PCR-laboratoriedesign:
1, PCR-laboratorieanordning
PCR-amplifieringstestlaboratorium är i princip indelat i tre separata arbetsområden: reagenslagrings- och beredningsområde, provberedningsområde, amplifierings- och förstärkningsproduktanalysområde. För att undvika korskontaminering måste in i varje arbetsområde strikt följa en enda riktning, det vill säga endast från reagenslagrings- och beredningsområdet → provberedningsområdet → amplifierings- och förstärkningsproduktanalysområdet. Överföringen av reagens och prover mellan varje försöksområde bör genomföras genom överföringsfönstret.
2. Luftkonditionerings- och ventilationssystemdesign och tryckkontroll
PCR-laboratoriet har inga strikta krav på reningsnivå, men för att undvika möjligheten till korsföroreningar mellan olika försöksområden är det tillrådligt att anta en fullständig leverans- och fullständig organisationsform för avluft. Samtidigt måste förhållandet mellan lufttillförsel och avgas kontrolleras strikt för att säkerställa tryckkraven för varje försöksområde.
(1) Reagenslagrings- och beredningsområde
Huvudoperationerna i detta experimentområde är framställningen av lagringsreagens, utdelningen av reagens och beredningen av huvudreaktionsblandningen. Reagens och material som används för provberedning bör transporteras direkt till detta område och inte genom andra områden. Reagensråvarorna måste förvaras i denna zon och beredas i de lagringsreagens som krävs i denna zon. För att kontrollera luftflödetrycket bör detta område bibehålla ett litet positivt tryck utanför.
(2) Provberedningsområde
De huvudsakliga operationerna inom detta område är provbevaring, nukleinsyra (RNA, DNA) extraktion, lagring och tillsats till amplifieringsreaktionsröret och mätning av DNA-syntes. Tryckgradienten i detta område måste vara positivt tryck i förhållande till det angränsande området för att undvika att aerosolföroreningar kommer in i området från det angränsande området. Eftersom kontaminering orsakad av aerosoler kan uppstå under provbelastningsoperationer bör dessutom onödiga promenader i detta område undvikas.
(3) Analysområde för förstärkning och förstärkning
Huvudoperationerna inom detta område är DNA-amplifiering och bestämning av amplifierade fragment. Dessutom kan tillsatsen av den beredda DNA-mallen (från provberedningsområdet) och beredningen av huvudreaktionsblandningen (från reagenslagrings- och beredningsområdet) till en reaktionsblandning också genomföras inom detta område. Tryckgradientkraven i detta område är: negativt tryck relativt det angränsande området för att undvika aerosolläckage från detta område. För att undvika föroreningar orsakade av aerosoler bör onödiga promenader i området minimeras. Enskilda operationer, till exempel provtillägg, bör utföras i en ultra-ren bänk.
3. Förhindrande och kontroll av föroreningar
Kärnfrågan i PCR-laboratoriedesign är hur man undviker förorening. I faktiskt arbete är följande typer av föroreningar vanliga: förorening av förstärkta produkter; kontaminering av naturligt genomiskt DNA; kontaminering av reagenser och kontaminering mellan prover. Eftersom en gång föroreningar inträffar måste experimentet stoppas tills källan till föroreningen hittas, och resultatet av experimentet måste ogiltigförklaras och experimentet måste upprepas. Därför är det tidskrävande och tråkigt att hitta föroreningskällan runt laboratoriet efter att föroreningen inträffat, och avfallskraft och materialresurser. För att undvika förorening bör därför den första prioriteringen vara förebyggande, inte eliminering.
(1) Strikt uppdelning av arbetsområdet
Inställningen för varje experimentområde är rimligt; varje försöksområde bör ha uppenbara markeringar (såsom iögonfallande husnummer eller olika markfärger etc.) för att undvika förvirring av utrustning och reagens i olika försöksområden.
(2) Rimliga systeminställningar
Rimliga inställningar för luftkonditionering och ventilationssystem, försök att använda full leverans och fullständiga luftkonditioneringssystem; strikt kontroll av luftflödet för att säkerställa olika tryckkrav i olika försöksområden.
(3) Standarddrift
Teknikerna för laboratoriet för amplifieringstest måste genomgå utbildning på jobbet, och först efter att ha varit kvalificerade kan de delta i klinisk genamplifieringstest; under den experimentella operationen måste operatören bära handskar och byta dem ofta. Dessutom är användningen av engångslockor vid operationen också en effektiv åtgärd för att förhindra förorening; rengöringsarbetet är i rätt tid och korrekt. När det experimentella arbetet är över måste området rengöras omedelbart. Förutom den konventionella desinfektionsvätskan för att torka och desinficera ytan eller bestrålningsdesinfektion av ultraviolett ljus, bör även experimentell utrustning autoklaveras.
(4) Strikt hantering
Kontrollera strikt personal som kommer in och lämnar laboratoriet. Personal som inte har något att göra med experimentet får inte komma in och lämna laboratoriet när som helst. Om möjligt, ställ in oberoende passager och dörrar för att komma in och lämna hela experimentområdet; minimera onödig promenad i försöksområdet för att minska risken för korskontaminering; amplifieringsprodukter Analysområdet är den huvudsakliga källan till kontaminering av amplifierade produkter. Avfallsvätska kan inte dumpas i laboratoriet. Det måste blötläggas och desinficeras i ett desinfektionsmedel och kastas bort från laboratoriet. Engångsmaterial som använt tips bör också desinficeras. Efter blötläggning och desinfektion, enhetlig behandling, såsom förbränning osv .; området för förstärkningsproduktanalyser kan använda vissa genetiska mutationer och toxiska ämnen, och särskild uppmärksamhet bör ägnas åt säkerhetsskyddet för experimentpersonal.
(5) Komplett laboratoriebärande anläggningar
Kompletta laboratoriebärande anläggningar är nödvändiga för att säkerställa det experimentella arbetet. Motsvarande utrustning och instrument bör utrustas enligt de olika experimentella innehållen i varje laboratorium, till exempel ultra-rena bänkar, centrifuger, provtagare, etc.